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Aug 13, 2023

Identificação do novo patógeno potencial Trueperella pecoris com significado interespécies pelo diagnóstico LAMP

Scientific Reports volume 13, Artigo número: 14005 (2023) Citar este artigo 504 Acessos 2 Detalhes da Altmetric Metrics Trueperella pecoris foi descrita como uma nova espécie do gênero Trueperella em

Scientific Reports volume 13, Artigo número: 14005 (2023) Citar este artigo

504 Acessos

2 Altmétrico

Detalhes das métricas

Trueperella pecoris foi descrita como uma nova espécie do gênero Trueperella em 2021 e pode ser patogênica para várias espécies animais. No entanto, a falta de um sistema de testes de diagnóstico adequado impede a realização de inquéritos epidemiológicos para esclarecer possíveis causalidades. Neste estudo, foi desenvolvido e validado um ensaio de Amplificação Isotérmica Mediada por Loop (LAMP) altamente específico para T. pecoris. O ensaio forneceu uma sensibilidade analítica de 0,5 pg/25 µL e mostrou 100% de inclusividade e exclusividade para 11 cepas alvo e 33 cepas não-alvo, respectivamente. Três métodos diferentes de extração de DNA foram avaliados para selecionar o método mais compatível com LAMP para ruptura celular em amostras puras e complexas. Usando uma extração de DNA de tampão único aplicável no local com aquecimento adicional, o limite de detecção baseado em células foi de 2,3 UFC/reação. Finalmente, o ensaio LAMP foi validado por meio de amostras de tecido pulmonar suíno contaminadas artificialmente, nas quais foram detectáveis ​​cargas microbianas mínimas entre 6,54 e 8,37 × 103 UFC por amostra de swab. O ensaio LAMP estabelecido neste estudo representa um procedimento diagnóstico adequado para identificar T. pecoris em amostras clínicas e ajudará a coletar dados epidemiológicos sobre a patogenicidade desta espécie.

Em 2021, Trueperella (T.) pecoris foi introduzida como uma nova espécie do gênero Trueperella por Schönecker et al.1. As cepas foram isoladas de amostras de gado leiteiro sofrendo de mastite ou aborto e de um porco morto apresentando pleurisia fibrinosa e broncopneumonia supurativa durante a necropsia. Além desta bactéria, outros potenciais patógenos também foram co-isolados, de modo que uma ligação etiológica não pôde ser comprovada, mas também não pôde ser excluída. Com base nos levantamentos anamnésicos e nos resultados dos exames culturais, os autores suspeitaram de pelo menos um provável envolvimento de T. pecoris na patogênese dos casos de mastite descritos naquele estudo1. No entanto, outras espécies do género Trueperella, como T. abortisuis e T. pyogenes também têm sido associadas a manifestações patológicas em suínos, incluindo aborto ou inflamação de múltiplos órgãos2,3. Recentemente, outra cepa de T. pecoris foi isolada da vestibulite necrótica de um camelo4.

Além das origens de isolados bacterianos descritas anteriormente e de suas características fenotípicas e genotípicas, nenhuma informação está disponível sobre esta nova espécie de Trueperella. A sua distribuição e significado patogénico permanecem obscuros, especialmente porque faltam métodos de detecção praticáveis, específicos e fiáveis. O exame cultural seguido de diferenciação bioquímica e sequenciamento do gene 16S rRNA, conforme descrito por Schönecker et al.1, já pode oferecer possibilidades para a identificação de T. pecoris, mas é muito trabalhoso e demorado. Para estudar eficientemente a epidemiologia deste potencial patógeno, são necessários métodos de diagnóstico rápidos adequados para a triagem de um grande número de amostras heterogêneas.

Como estão disponíveis informações detalhadas sobre sequências de várias cepas de T. pecoris1, o desenvolvimento de métodos de detecção molecular, por exemplo, baseados na Amplificação Isotérmica Mediada por Loop (LAMP), deve ser considerado. Esta técnica foi introduzida em 20005 e desde então tem ganhado muita atenção na comunidade científica. Comparado a métodos alternativos como PCR, o LAMP permite amplificação rápida e contínua a uma temperatura constante, eliminando a necessidade de um dispositivo de termociclagem caro e não portátil6. Além disso, o método mostrou-se altamente específico e sensível na detecção de alvos genômicos, ao mesmo tempo em que é robusto a componentes inibitórios em diversas amostras7, 8. As reações podem ser realizadas com baixo custo, por exemplo, utilizando um bloco de aquecimento9. Para a detecção subsequente de produtos LAMP, estão disponíveis vários métodos, que muitas vezes se baseiam numa mudança de cor visível ou numa turvação gerada10. Além das opções de baixo custo para a realização desse método, que podem ser de grande benefício em ambientes laboratoriais limitados, também existem no mercado fluorômetros ou turbidímetros portáteis em tempo real11,12. Eles oferecem recursos adicionais, como monitoramento em tempo real da reação LAMP ou geração de curva de fusão para avaliar a especificidade de um produto LAMP.